我國慢性胃炎、胃潰瘍發病率較高,統計數據 表明,發病率可達 60%以上,為臨床上常見多發 病 。現代醫學治療胃炎、胃潰瘍多對癥處理,藥 物多為嗎丁啉和維酶素等,或針對主要致病因素——幽門螺桿菌(helicobacter pylori,HP)多種抗 生素聯合治療,如采用質子泵抑制劑加克拉霉素 加阿莫西林或甲硝唑三聯療法 。雖然取得一定 療效,但愈后復發率高,且病程又長,服藥時間長,還帶來胃腸道不適、失眠、頭昏、頭痛等副作用,尤 其是隨著抗生素的廣泛使用,HP對常用抗生素的 耐藥情況日益嚴重 。
T2K202中試提取機組、2K00401濃縮機組(江 漢醫療制藥設備有限公司),2002 型旋轉蒸發儀 (上海申勝生物技術有限公司),DZF6050 型真空干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司),CCPP-176 聚丙烯層析柱(天津市德固特科技發展有限公 司),Wistar 大鼠[(200±10)g,湖北中醫藥大學], 姜半夏、干姜、黃芩、黃連、黨參、灸甘草、大棗(湖 北強康中藥飲片有限公司),AB-8樹脂(安徽三星樹脂有限公司),質量分數95%乙醇(藥用級,湖南 爾康制藥股份有限公司),水為注射用水(湖北科 益藥業股份有限公司)。
水提對照樣品制備:稱取姜半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、 黃連2 kg、大棗2 kg,煎煮2次,每次2 h,第一次加 水 200 L,第二次加水 160 L,合并提取液,孔徑為 150 μm篩過濾,減壓濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至 細粉備用。
20%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質量分數為20%乙醇 (以下簡稱20%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 20%乙醇 200 L,第 2 次加 20%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用20%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細粉備用。
40%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連 2 kg、大棗2 kg,用質量分數為40%乙醇 (以下簡稱40%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 40%乙醇 200 L,第 2 次加 40%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用40%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60℃真空干燥,粉碎至細粉備用。
60%乙醇提取組分制備:稱取姜半 夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草 3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質量分數為60%乙醇 (以下簡稱60%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 60%乙醇 200 L,第 2 次加 60%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用60%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細粉備用。
1.2.5 樣品5
80%乙醇提取組分的制備:稱取姜 半夏 4 kg、黃芩 3 kg、干姜 3 kg、黨參 3 kg、炙甘草3 kg、黃連2 kg、大棗2 kg,用質量分數為80%乙醇 (以下簡稱80%乙醇)加熱回流2次,每次2 h,第1 次加 80%乙醇 200 L,第 2 次加 80%乙醇 160 L,合 并提取液,孔徑為 150 μm 篩過濾,將濾液減壓濃 縮至相對密度為1.10的濃縮液,濃縮液上AB-8型 大孔吸附樹脂柱(20 kg AB-8樹脂裝柱,樹脂重量 為藥材重量的1倍),用80%乙醇85 L(為大孔吸附 樹脂柱體積的5倍)洗脫樹脂柱,收集洗脫液,減壓 濃縮,60 ℃真空干燥,粉碎至細粉備用。
取健康Wistar大鼠,隨機分為正常對照組、樣 品1~5組,每組均10只,雌雄各半。1~5組的給 藥劑量相同,即將干膏折算成生藥材的重量,按 10 g生藥材每1 kg體重進行灌胃給藥,正常對照組 給予等容量蒸餾水。試驗第一天上午各組分別灌 胃1次,下午開始禁食不禁水,第二、三天上午再分 別灌胃 1 次,第三天下午(即禁食 48 h 后)開始手 術。手術時,將大鼠用乙醚麻醉、沿腹中線切開腹 壁,找出胃與十二指腸,用縫合線避開血管結扎胃 幽門與十二指腸結合部,并由十二指腸再給藥一 次,隨后縫合腹壁、碘酊消毒后放回籠中,同時禁 食禁水。18 h后,拉頸椎處死大鼠,剖腹取出胃并 收集胃液,隨即向胃內注入質量分數為1%福爾馬 林溶液10 mL,再將胃放入質量分數1%福爾馬林 溶液中固定 10 min 以上。然后沿胃大彎剪開胃, 將其平展于玻璃板上,仔細觀察前胃部粘膜潰瘍 的發生情況,并按下述標準進行潰瘍分級。0:無 潰瘍;1:潰瘍點、出血點(<1 mm);2:1~5 個小 潰瘍(>1 mm,<3 mm);3:6個以上小潰瘍或1個 大潰瘍(>3 mm);4:2個以上大潰瘍;5:穿孔性潰 瘍 。
取健康 Wistar 大鼠,隨機 分為正常對照組、樣品1~5組,每組均10只,雌雄 各半。進行灌胃給藥,正常對照組給予等容量蒸餾水。 連續 3 d,每天灌胃一次,最后一次灌胃后 0.5 h, 從大鼠左后肢足趾皮下注射新鮮蛋清0.1 毫升/只 致炎。致炎前測量一次踝關節周長,并于致炎后 2 h分別測量一次踝關節周長,計算關節腫脹率 。
幽門螺桿菌 (HP)是一種革蘭陰性需氧螺桿菌,目前全世界超 過50%的人受其感染,是導致胃炎、胃潰瘍的一種 最常見致病因素,WHO將其定為胃的Ⅰ類致病因 子 。本試驗將考察不同分離部位對HP 的殺滅 效果。取健康Wistar大鼠,隨機分為正常對照組、無治療藥物組、樣品1~5組、每組均10只,雌雄各 半。除正常對照組外其余各組連續10天空腹灌胃 食醋2.5 mL/只;第11天,采用空腹束縛水浴6 h;從 第 12 天起,上述隔天空腹灌胃 HP 混懸液(1×109 CFU/mL)1.5 mL/只,共3次;第16天除正常對照組 和無治療藥物模型對照組外其余各組灌胃給藥, 連續給藥 10 天。第 25 天下午所有組動物禁食過 夜,次日將各組動物脫頸椎處死,在無菌的條件 下,取胃粘膜快速進行尿素酶試驗和 HP 接種培 養,同時直接涂片觀察HP陽性率。
用藥效結果 各提取組分對大鼠幽門結扎型胃潰瘍的抑制 作用藥效試驗結果用t值法進行統計分析,結果見 表1。
藥效結果顯示,采用 40%乙醇提取和洗脫得 到的提取組分(樣品3)對大鼠幽門結扎型胃潰瘍 具有顯著的抑制作用,效果略優于傳統水煎,表明 該分離部位對胃潰瘍有較好的治療作用。
本研究對半夏瀉心湯提取方法進行工藝改 進,采用不同濃度的乙醇提取和純化,得到不同的 提取組分,通過藥效試驗考察各提取組分抑制胃 潰瘍、抗炎以及殺滅HP的作用,并與古代水煎工 藝進行對比。結果表明,采用質量分數為 40%乙 醇提取,并通過AB-8樹脂富集,5倍量樹脂體積的 40%乙醇洗脫得到的提取組分對胃炎、胃潰瘍有 良好的治療作用,在不影響藥效的前提下,大大減 少了患者的服用量,為將古方制備成方便服用、質 量可控、易保存現代制劑(顆粒、片劑、膠囊、口服 液等)提供了技術和理論依據。