材料和方法
增儀上海生工生物工程技術服務有限公司、超低溫冰箱 GL-9668FNUAIRE(美國)、NucleoSpin96soil 試劑盒(德國)、 MISEQ03IlluminaMiSeq 基因測序儀上海美吉生物醫藥科技有限 公司。2 操作要點 海南山蘭米酒選用優質的海南蘭山稻為原料;采用傳統的工 藝釀造方法經過浸泡、蒸熟揉散成粒,再把用黎山特定植物和米 粉制成的“球餅”碾至粉狀摻入其中,然后放置在墊滿芭蕉葉的 錐形竹筐內,上面也用芭蕉葉封蓋,一日后取少量冷水沁入并封 口埋到芭蕉樹下自然成酒。一年后,米、糟、葉均稀化成漿液, 故稱“山蘭玉液”、“瓊漿玉液”,被視為黎族的茅臺川三天后, 朝下的竹筐尖部開始往置于筐下的陶土罐子里滴出漿水,得到山 蘭純液,呈乳白色。用無菌水稀釋至 1 ng/uL。以稀釋后的基因組 DNA 為模板,基因組測序由上海美吉生物醫藥科技有限公司通過 MiseqIllumina 平臺完成。增儀上海生工生物工程技術服務有限公司、超低溫冰箱 GL-9668FNUAIRE(美國)、NucleoSpin96soil 試劑盒(德國)、 MISEQ03IlluminaMiSeq 基因測序儀上海美吉生物醫藥科技有限 公司。
結果與分析
整個發酵過程中的優勢微生物主要有 Firmicute(厚壁菌),其次是 Proteobacteria(變形桿菌屬),樣品 A 的 物種豐富度最低,樣品 B 的物種豐度最高,有除了以上兩種,還有 Bacteroidetes(擬桿菌)、Chloroflexi(綠灣菌)。說明,在發酵過程中 初期的微生物種類比較少,主要受 Firmicute(厚壁菌)影響,發酵 中期的物種豐富度最高。這可能是由于變形菌門的一部分細菌為 好氧型,不能適應米酒發酵過程中缺氧、產酸、產醇的環境,因 而豐度降低;而 Firmicute(厚壁菌)中的乳桿菌和乳球菌大多數為 厭氧細菌,能夠產酸且在高酸環境下生長,所以整個過程中厚 壁菌屬數量變化不大。同時基于在 OTU 水平等級系數,對樣品中 的優勢物種相關性進行分析,則說明在發酵的前 期和末期相似度較高,物種豐富度較低。
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