雷貝拉唑鈉是一種新型的質(zhì)子泵抑制劑，可于治療 酸相關(guān)性疾病，如消化性潰瘍、胃食管反流性疾病、卓 - 艾氏綜合征等，具有選擇性強烈抑制幽門螺桿菌（Hp） 作用，在臨床使用中有顯著性優(yōu)勢。注射用雷貝拉唑 鈉在生產(chǎn)中控制熱原具有其必要性 ，通常采用加活性 炭的方式。但《已上市化學(xué)仿制藥（注射劑）一致性 評價技術(shù)要求（征求意見稿）》中要求注射劑生產(chǎn)中不建 議使用活性炭，為了有效去除熱原（細(xì)菌內(nèi)毒素），需加 強對原輔包、生產(chǎn)設(shè)備等的控制 。采用的方法有家兔 法測定熱原或凝膠法和光度測定法測定細(xì)菌內(nèi)毒素。 由于家兔法更耗時、檢驗成本更高，故通常采用制定細(xì) 菌內(nèi)毒素限度的方式進(jìn)行控制。

1 材料和方法

1.1 儀器

N10 試管恒溫儀（杭州奧盛儀器有限公司）；XH-D 渦旋混合器（上海允延儀器有限公司）；ML204T 天平［梅 特勒托利多儀器（上海）有限公司］；精宏DHG-9246A 電熱 恒溫鼓風(fēng)干燥箱（上海精宏實驗設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

雷貝拉唑鈉（珠海潤都制藥股份有限公司，批號 ： 88817110102、88814080102）；雷 貝 拉 唑 鈉（Metrochem API Private Limited，批號：RBS/1508298）；細(xì)菌內(nèi)毒素 工作標(biāo)準(zhǔn)品（湛江安度斯生物有限公司，批號 ：1708160、180101、1806131，效價：10 EU/ 支 ) ；鱟試劑（湛江安 度斯生物有限公司，規(guī)格 ：0.1 ml/ 支，標(biāo)示靈敏度 ：0.25 EU/ml，批號：1703013；標(biāo)示靈敏度：0.125 EU/ml，批號： 1804161 ；標(biāo)示靈敏度 ：0.06 EU/ml，批號 ：1803051）；鱟 試劑（福州新北生化工業(yè)有限公司，規(guī)格 ：0.1 ml/ 支，標(biāo) 示靈敏度 ：0.25 EU/ml，批號 ：17031712 ；標(biāo)示靈敏度 ： 0.125 EU/ml，批號 ：18041812 ；標(biāo)示靈敏度 ：0.06 EU/ml， 批號 ：17091312）；稀釋劑Ⅱ（湛江安度斯生物有限公司， 批號：1801220；規(guī)格：4.0 ml / 支）；細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（湛 江安度斯生物有限公司，批號：1608010、1804280；規(guī)格： 5 ml / 支）。

1.3 方法

取供試品，加細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水稀釋至濃度為 2C 的供試品儲備液與 C 的供試品溶液 ；用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查 用水將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶解稀釋制成濃度為 4λ 的 細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液與濃度為 2λ 的陽性對照溶液 （B）；取 0.5 ml 濃度為 4λ 的細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品溶液 和 0.5 ml 濃度為 2C 的供試品儲備液混勻，作為供試品 陽性對照溶液 ；以細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對照溶 液。取鱟試劑，用 0.1 ml 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水復(fù)溶后， 分別加入 0.1 ml 供試品溶液、陽性對照溶液、供試品陽 性對照溶液、陰性對照溶液，各平行兩管，輕輕混勻后， 放入（37±1）℃試管恒溫儀中，保溫（60±2）min。

2 結(jié)果

2.1 細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

根據(jù)其制劑注射用雷貝拉唑鈉原研說明書中的用法 用量 ：按靜脈輸注給藥，注射用雷貝拉唑鈉規(guī)格為 20 mg，使用量為每日 1 瓶，滴注時間在 15~30 min 內(nèi)。計 算確定雷貝拉唑鈉內(nèi)毒素的限值（L）為 15 EU/mg。 本品為注射用雷貝拉唑鈉原料，為保證其制劑的質(zhì) 量及用藥安全，該原料細(xì)菌內(nèi)毒素限值須嚴(yán)于其制劑臨 床用藥計算的最大限制（15 EU/mg），考慮該制劑生產(chǎn) 工藝、生產(chǎn)用水及其它輔料的帶入，故我們將雷貝拉唑 鈉內(nèi)毒素限值（L）1 EU/mg 定為企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

2.2 最低有效稀釋濃度的確定

計算公式為 C=λ/L。式中，C 為最低有效稀釋濃度 ； λ 為在凝膠法中鱟試劑的標(biāo)示靈敏度 ；L 為供試品的細(xì) 菌內(nèi)毒素限值，以 EU/mg 表示，為 1 EU/mg ；當(dāng) λ 為0.25 EU/ml，C=0.25 mg/ml ；λ 為 0.125 EU/ml，C=0.125 mg/ml ；λ 為 0.06 EU/ml，C=0.06 mg/ml。

2.3 鱟試劑靈敏度復(fù)核試驗

將各靈敏度（λ）的鱟試劑用細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水 0.1 ml 復(fù)溶，分別加入 2λ、λ、0.5λ 和 0.25λ 四個濃度的 細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液 0.1 ml，每一個濃度平行做 4 管， 另取 2 管加入 0.1 ml 細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水作為陰性對照。 當(dāng)最高濃度為 2λ 管均為陽性，最低濃度 0.25λ 管均為陰 性，陰性對照管均為陰性，試驗方為有效。當(dāng) λc［λc= lg － 1（∑X/4）］在 0.5λ ～ 2λ 之間時，結(jié)果均符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

3 討論

方法篩選過程中發(fā)現(xiàn)使用靈敏度為 0.25 EU/ml 的鱟 試劑檢測時，其最高不干擾濃度為 0.25 mg/ml，與其最 低有效稀釋濃度一致，故采用最低有效稀釋濃度檢測時， 存在 PPC 管呈陰性的風(fēng)險。由于其溶液 pH 不在 6.0 ～ 8.0 這一適宜 pH 范圍內(nèi)，考慮使用稀釋劑Ⅱ作為稀釋劑， 將 pH 調(diào)節(jié)至該范圍內(nèi)，但干擾情況未得到改善，且發(fā) 現(xiàn)使用該稀釋劑雷貝拉唑鈉溶解度變差，故仍以細(xì)菌內(nèi) 毒素檢查用水為溶劑為宜。為減小供試品溶液檢測濃度， 考慮使用小靈敏度的鱟試劑檢驗，為保證其 2C 濃度下 無干擾，故選擇靈敏度為 0.06 EU/ml 的鱟試劑。

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