鹽酸莫西沙星為第四代新型喹諾酮類(lèi)抗菌藥物，具 有廣譜抗菌活性，抗菌的作用機(jī)制為抑制拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ 和拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅳ，阻斷細(xì)菌 DNA 合成，主要優(yōu)勢(shì)是耐 藥性極低，為 1.8×10-9~1×10-11，特別是不易與其他喹諾 酮類(lèi)抗生素產(chǎn)生交叉耐藥。與第三代喹諾酮類(lèi)藥物相比， 它進(jìn)一步提高了對(duì)革蘭陽(yáng)性菌如肺炎球菌的抑制活性， 同時(shí)也可以有效抑制厭氧菌。抗非發(fā)酵菌（假單胞菌屬 和洋蔥伯克霍爾德菌（Burkholderia cepacia）除外）、葡 萄球菌、肺炎鏈球菌、腸球菌和厭氧菌的活性是環(huán)丙沙 星和氧氟沙星的 2~16 倍 ；抗大腸埃希菌的活性是環(huán)丙沙星的 50%，而抗沙眼衣原體、肺炎衣原體和支原體的活 性都比環(huán)丙沙星高。鹽酸莫西沙星開(kāi)發(fā)的制劑包括片 劑，滴眼液，注射液，療效顯著。

于鹽酸莫西沙星自身的抗菌活性，常規(guī)檢測(cè)方法 未必能真實(shí)反映其原料藥中的微生物負(fù)載，但藥品微生 物限度是藥品安全性的重要指標(biāo)之一，法規(guī)文件也對(duì)此 提出了明確要求。所以，進(jìn)行微生物限度檢查時(shí)，要 求供試品自身在試驗(yàn)的條件下能有效排除其抑菌作用， 使其不干擾染菌的限度檢驗(yàn)，檢測(cè)方法通過(guò)驗(yàn)證可以確 認(rèn)供試品所采用的檢查方法和檢驗(yàn)條件適用。

為消除鹽酸莫西沙星的抑菌活性，準(zhǔn)確檢測(cè)出每克 原料實(shí)際微生物負(fù)載量，本研究確認(rèn)培養(yǎng)基適用性之后， 采用薄膜過(guò)濾法，選擇氯化鎂溶液作為中和劑，并以聚 山梨酯 80 作為中和劑同時(shí)比較，旨在驗(yàn)證該方法適用于 鹽酸莫西沙星原料藥中微生物限度的檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)所用菌株為即用型定量菌株，金黃色葡萄 球 菌 CMCC(B)26003（批號(hào) 20181008）；枯 草 芽 胞 桿 菌 CMCC(B)63501（批號(hào) 20180908）；銅 綠 假 單 胞 菌 CMCC(B) 10104（批號(hào) 20180809）；白 色 假 絲 酵 母 CMCC(F) 98001（批號(hào) 20180904）；黑 曲 霉 CMCC(F) 98003（批號(hào) 20180817）。以上菌株均為 3 代，全部購(gòu) 自浙江泰林生物技術(shù)股份有限公司。其凍干粉直接用商 品配套溶液復(fù)溶，配制成菌懸液濃度為每 0.1 ml 不超過(guò) 100 cfu。 胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào) 20181025）和沙氏葡 萄糖瓊脂培養(yǎng)基（批號(hào) 20170837），均購(gòu)自浙江泰林生 物技術(shù)股份有限公司 ；胰酪大豆胨瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基（批 號(hào) 135025-201603）和沙氏葡萄糖瓊脂對(duì)照培養(yǎng)基（批 號(hào) 135013-201502），購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院。

鹽酸莫西沙星原料（印度瑞迪實(shí)驗(yàn)制藥股份有限公 司，批號(hào) ABKH005846），氯化鎂（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑 有限公司，批號(hào) 20181130），pH 7.2 無(wú)菌磷酸鹽緩沖液（自 制，批號(hào) 20181127）。

BHC-1300IIA2 生物安全柜（蘇州時(shí)金凈化設(shè)備科 技有限公司）；生化培養(yǎng)箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）； ES-315 全自動(dòng)滅菌鍋（日本 Tomy 公司）；KBF220 一次 性使用集菌過(guò)濾培養(yǎng)器（溫州維科生物實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公 司）；XK97-A 菌落計(jì)數(shù)器（邦西儀器科技（上海）有限 公司）。

按定量菌株要求分別配制好菌懸液，使每 0.1 ml 菌 液濃度不超過(guò) 100 cfu ；按照培養(yǎng)基說(shuō)明書(shū)要求，配制好 培養(yǎng)基。取金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌和枯草芽胞 桿菌菌懸液各 0.1 ml，分別各注入 2 個(gè)無(wú)菌平皿中，立 即傾注胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基，混勻，凝固，于 30~35 ℃倒置培養(yǎng) 3 d。白色假絲酵母和黑曲霉同法操作菌，但于 30~35 ℃倒置培養(yǎng) 5 d ；同時(shí)，還將他們置于沙氏葡萄 糖瓊脂培養(yǎng)基 20~25 ℃培養(yǎng) 5 d。細(xì)菌和真菌均須用相應(yīng) 的對(duì)照培養(yǎng)基替代被檢培養(yǎng)基進(jìn)行上述試驗(yàn)。 逐日觀察需氧菌和真菌的菌落生長(zhǎng)情況，進(jìn)行菌落 計(jì)數(shù)，取平均值計(jì)算比值。觀察比較試驗(yàn)菌在被檢培養(yǎng) 基上與相應(yīng)的對(duì)照培養(yǎng)基上的菌落的數(shù)量、形態(tài)和大小。

稱量鹽酸莫西沙星原料 10 g，溶于 1 000 ml pH 7.2 無(wú)菌磷酸鹽緩沖液，作為 1 ∶ 100 的供試液。 1）試驗(yàn)組 取供試液 100 ml 與 0.1 ml 的金黃色葡 萄球菌的菌懸液混勻，過(guò)濾，用 700 ml pH 7.2 無(wú)菌磷酸 鹽緩沖液沖洗，每次 100 ml，沖洗 7 次 ；將濾膜取出， 菌面向上，貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿上（平行制 備 2 個(gè)平皿），于 30~35 ℃倒置培養(yǎng)不超過(guò) 3 d，進(jìn)行菌 落計(jì)數(shù)。銅綠假單胞菌和枯草芽胞桿菌同法操作。而白 色假絲酵母和黑曲霉須同法操作各制備 2 張濾膜，分別 貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基平皿和沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng) 基平皿上，置于 30~35 ℃和 20~25 ℃倒置培養(yǎng)不超過(guò) 5 d。 2）菌液對(duì)照組 取稀釋液 100 ml 代替供試液，加 入 0.1 ml 的菌懸液（不超過(guò) 100 cfu），混勻，過(guò)濾，按 試驗(yàn)組同法操作。 3）供試品對(duì)照組 取供試液 100 ml，不接入試驗(yàn)菌， 按照試驗(yàn)組同法操作。 4）空白對(duì)照組 用稀釋液 100 ml 代替供試液，不 接入試驗(yàn)菌，按照試驗(yàn)組同法操作。 試驗(yàn)組菌數(shù)回收率 =（試驗(yàn)組菌落數(shù) - 供試品對(duì)照 組菌落數(shù)）/ 菌液對(duì)照組菌落數(shù) ×100%。 上述試驗(yàn)獨(dú)立平行操作 3 次。

分別以 4.0% 聚山梨酯 80 和 2 mol/L 氯化鎂為中和 劑，各組每 100 ml 培養(yǎng)基中加入了 5 ml 中和劑，其余 按 1.4.2 操作。

被檢與對(duì)照培養(yǎng)基菌落平均數(shù)的比值均在 0.5 ～ 2 范圍內(nèi)，且菌落形態(tài)大小與對(duì)照培養(yǎng)基的菌落一致（表 1），說(shuō)明培養(yǎng)基適用性檢查符合要求。

2.2 不加中和劑

鹽酸莫西沙星對(duì)細(xì)菌的抑菌活性較強(qiáng)，檢測(cè)需氧菌 總數(shù)時(shí)需要添加合適的中和劑抑制其自身的抗菌活性 ； 白色假絲酵母和黑曲霉的回收率在 0.5 ～ 2.0 之間（表 2）， 符合藥典規(guī)定要求，表明可直接進(jìn)行霉菌和酵母菌的微生物限度檢測(cè)。

3 討論

不同的產(chǎn)品，或者同一產(chǎn)品用途不同，微生物限度的檢測(cè)方法都存在差異，需要建立合適的方法。根 據(jù)中國(guó)藥典 2015 版通則 1105 要求，本研究首先確認(rèn) 了培養(yǎng)基適用性，然后驗(yàn)證計(jì)數(shù)方法適用性，即微生物 限度檢測(cè)方法適用性。 鹽酸莫西沙星在水中溶解度不是特別好，選擇 pH 7.2 磷酸鹽緩沖液，可以提高溶解度，并且溶液 pH 穩(wěn)定。 鹽酸莫西沙星配成 1 ∶ 100 的供試液，取 100 ml，采用 薄膜過(guò)濾法，單張薄膜菌落數(shù)即可為每克原料的微生物 負(fù)載量，無(wú)需換算，符合檢測(cè)限度要求的量。 鹽酸莫西沙星屬于喹諾酮類(lèi)藥物，對(duì)金黃色葡萄球 菌、銅綠假單胞菌，枯草芽胞桿菌有明顯抑制作用，未 加中和劑或加中和劑聚山梨酯 80 時(shí)，這三種細(xì)菌的回 收率均為0。