珠子草 Phyllanthus niruri Linn.為大戟科葉下珠 屬植物,又名月下珠、小返魂、霸貝菜,全草入藥, 是印度與我國的傳統民間草藥,具有平肝清熱、利水 解毒功效,臨床用于治療肝炎、腸炎、尿路感染、無 名腫痛及糖尿病等。研究顯示,珠子草主要活性 成分為多酚類及木脂素類,其中多酚類包括柯里拉 京、沒食子酸和鞣花酸等。迄今對珠子草藥材的 基礎研究主要集中在化學成分、藥理作用及機制方 面,臨床研究主要集中在抗乙肝病毒、改善肝功能和 抗肝細胞纖維化等方面,而針對珠子草有效成分 含量、質量綜合評價與控制的研究相對較少,限制了 珠子草藥材的應用和開發。珠子草曾收載于地方標準 2005 年版《云南省中藥材標準》,只有簡單的性狀描 述等,質量標準不完善。為了更好開發利用珠子草, 合理評價和控制該藥材的質量,對其質量標準進行提 高和系統性研究尤為必要。
美國 Agilent 1260 高效液相色譜儀(四元梯度泵, DAD 檢測器,OpenLAB 色譜工作站),電子分析天平(賽多利斯電子天平),KH-100E 超聲波提取器(昆山禾創超聲儀器有限公司),BX51 生物顯微鏡(日本 Olympus 公司),電熱恒溫干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司),TDW 箱式電 阻爐(上海東星建材試驗有限公司),XMTD-204 恒溫水浴鍋(江蘇新康醫療器械有限公司)。 短葉蘇木酚對照品(德爾塔林試劑公司,批號 18490-0805,純度≥98%),柯里拉京對照品(中國食 品藥品檢定研究院,批號 111623-200302,純度≥ 98%),鞣花酸對照品(天津一方科技有限公司,批 號 00597,純度≥97%),珠子草對照藥材(中國食品 藥品檢定研究院,批號 121319-200301),乙醇(分析 純,天津市紅巖化學試劑廠),鹽酸(分析純,北京 化工廠),磷酸(色譜純,天津市科密歐化學試劑有 限公司),乙腈(色譜純,山東禹王實業有限公司化 工分公司),甲醇(色譜純,深圳西隴化工股份有限 公司),薄層硅膠 G 板(青島海洋化工集團公司),水為超純水,其他試劑均為分析純,無灰濾紙(杭州特 種紙業有限公司)。10 個不同產地珠子草藥材樣品來 源見表 1,經西北師范大學王慶瑞教授鑒定為大戟科 葉下珠屬植物珠子草 Phyllanthus niruri Linn.的全草。
樣品編號 | 產地 | 采收部位 | 采收日期 |
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1 | 云南景洪 | 全草 | 2018-09-11 |
2 | 云南勐臘 | 全草 | 2018-08-04 |
3 | 云南昆明 | 全草 | 2018-08-13 |
4 | 云南個舊 | 全草 | 2018-09-05 |
5 | 云南蠻耗 | 全草 | 2018-10-12 |
6 | 甘肅隴南武都 | 全草 | 2018-08-22 |
7 | 甘肅隴南陳縣 | 全草 | 2018-10-09 |
8 | 廣西南寧 | 全草 | 2018-09-15 |
9 | 廣西田林 | 全草 | 2018-08-17 |
10 | 臺灣新竹 | 全草 | 2018-10-15 |
本品長短不一,高 20~70 cm,根外表棕色至紅 棕色,直徑 2~6 mm,有縱紋,質硬、脆易折,折斷 面棕色至灰綠色;主根不發達,須根多數,淺灰棕色。 莖圓柱形,略帶褐紅色,直徑 1~4.5 mm,有縱皺紋, 體輕,質脆,易折斷,斷面灰綠色,髓部中空。單葉 互生,葉片紙質,長圓形,長約 4~10 mm,寬約 2~ 4.5 mm,葉柄極短,托葉披針形。花細小,腋生于葉 背之下。蒴果扁圓形或略呈圓三角形,直徑 1~1.5 cm, 紅褐色,平滑無毛,軸柱及花萼均宿存;種子 6 枚, 三角狀卵形,淡黃色或灰黃色,背側為上下縱紋,側 面為同心圓狀紋理。以葉多、青綠色者為佳。氣微香, 味苦。
根橫切面:表皮為 3~4 列長方形細胞,切向排 列。皮層較寬,少有裂隙,由數列疏松的薄壁細胞組 成。韌皮部狹窄,呈環帶狀,韌皮射線不明顯,篩管 散列,內含黃棕色分泌物。形成層呈環狀,為一列扁 平細胞。初生木質部導管較集中,次生導管稀疏略呈 放射狀排列,射線細胞 1~2 列徑向延長,導管多角 形,直徑 8.4~39.0 µm。木質部寬廣,木射線密集, 由 1~2 列細胞組成,射線間嵌有導管、木纖維及木 薄壁細胞,導管單個或 2~7 個徑向相聚成群、呈放 射狀排列,外側常有木纖維嵌于導管群間,薄壁細胞 含淀粉粒。 莖橫切面:表皮 3~4 列細胞,類方形,常脫落。 皮層 5~7 列類圓形、矩圓形細胞,排列較疏松。韌皮部約 6 列類圓形、類多角形細胞,篩管內充滿分泌 物。形成層為一列小型細胞,環狀排列。木質部寬廣, 導管稀疏,木射線明顯。薄壁細胞呈環狀分布,木質 部纖維發達,壁極厚,胞腔狹小。射線細密,1~3 列長方形細胞徑向延長。髓部薄壁細胞類圓形,排列 疏松,髓中央常呈空腔。 粉末特征:全草粉末灰綠色,味苦。木纖維常成 束,黃色或淡黃色,斷端平截或縱成帚狀,直徑 7.8~ 18.2 µm,長 80.6~447.2 µm。草酸鈣簇晶散在或存在 于葉肉組織中,直徑 10.4~28.6 µm;草酸鈣方晶眾 多,不規則,呈四面體、錐形、斧形等,直徑 5.2~ 26 µm。葉上下表皮細胞多角形,周壁彎曲,下表皮 氣孔密集,氣孔不定式或不等式,副衛細胞 3~4 個。 淀粉粒單粒,稀復粒,類圓形,臍點裂縫狀、人字狀 等,大小不一,直徑 5.2~18.2 µm 。
本研究分別從性狀、鑒別、檢查和浸出物、含量 測定四方面對珠子草藥材的質量標準進行研究,所建 立的珠子草薄層色譜定性鑒別和指標成分(短葉蘇木 酚、柯里拉京和鞣花酸)含量 HPLC 同時測定方法操 作簡便、重復性好、專屬性強,可用于該藥材的質量 控制和評價。 本研究以 10 個不同產地珠子草藥材為對象,建 立了珠子草 HPLC 指紋圖譜,確定了 8 個共有峰,以 對照品色譜圖指認了其中 2 個色譜峰,分別為短葉蘇 木酚和柯里拉京。相似度評價結果表明,不同產地珠 子草藥材中化學成分存在的差異性與其產地具有一 定的相關性。
主成分分析作為一種無監督模式識別法,利用降 維思想,將多個變量簡化為幾個綜合變量,最大限度 保留原樣本集所含的原始信息,建立的新變量為原變 量的線性組合,尋求主成分,以達到數據的壓縮和解 釋目的。不同產地珠子草中化學成分組成及含量存 在一定差異,主成分分析結果與樣品地理分布結果吻 合度較高,且與 HPLC 指紋圖譜相似度評價結果及薄 層鑒別結果也較為相似,能夠反映出不同產地珠子草 化學成分的差異性和相似性。此外,在所識別篩選出 的6個用于區別產地差異的特征性物質中指認柯里拉 京,初步推測其可作為區別產地差異的特征性物質。 從本研究結果可以初步得出,不同產地珠子草中化學 成分與其所在產地具有相關性,其原因可能與產地的 氣候、土壤等環境條件有關,具體還需進一步研究。
總之,本研究建立了同時測定珠子草中短葉蘇木 酚、柯里拉京和鞣花酸的 HPLC 方法,對不同產地珠 子草樣品進行測定。通過對測定結果進一步對比研究 發現,不同產地珠子草中短葉蘇木酚、柯里拉京和鞣 花酸的含量差異較大,有同一省份珠子草中上述 3 種 成分含量較為相似者,如 1 號和 4 號(云南景洪和云 南個舊);也有地理位置較為相近但 3 種成分含量差異較大者,如 6 號和 7 號樣品(甘肅省隴南市武都和 陳縣),以及 4 號和 5 號樣品(云南個舊與云南蠻耗)。 這一研究結果與主成分分析結果較為相似,從而進一 步論證了化學模式識別技術(如主成分分析)可用于 區別珠子草的來源(產地)。 本研究補充完善并擬定了珠子草質量標準草案, 利用常規指紋圖譜數據分析方法結合主成分分析對 不同產地珠子草藥材進行評價,可為建立珠子草藥材 整體性質量評價體系提供基礎和依據。